原位雜交是一種重要的生物技術(shù)手段,主要利用DNA雙鏈分子和特異性Probe分子建立原位雜交反應(yīng),當(dāng)Probe分子靠近DNA雙鏈時(shí),Probe分子上的特異性引物將在DNA雙鏈上的特異序列處引發(fā)雙鏈鏈接,從而形成一個(gè)叫做雜交的物料,然后利用特異的標(biāo)記物及檢測(cè)儀器,反映其存在與否及定量內(nèi)容。
原位雜交是利用
原位雜交儀將特異性的核酸直接定量地檢測(cè)到實(shí)時(shí)熒光發(fā)射,從而將基因表達(dá)水平空間化地進(jìn)行定量檢測(cè),集成了變性/雜交、雜交、多步運(yùn)行三種操作模式,適用于各種原位雜交實(shí)驗(yàn),是一種重要的實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)方法。
儀器特點(diǎn):
(1)敏感性高:非特異性污染非常低,可以檢測(cè)非常少量的mRNA、DNA等物質(zhì),具有很強(qiáng)的敏感性。
(2)靈敏度高:由于具有單一分子靈敏度,比傳統(tǒng)的定量PCR方法更加靈敏,可以快速檢測(cè)微量物質(zhì)的變化情況。
(3)節(jié)省時(shí)間:與傳統(tǒng)的PCR定量方法相比,原位雜交儀不需要建立分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),只需在準(zhǔn)備好的裝置上放置樣品和Probe,就可以節(jié)省大量的實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
?。?)精確度高:可以精確地測(cè)量和檢測(cè)具有特異性標(biāo)記或Probe物質(zhì)的變化,可以更準(zhǔn)確地定量和計(jì)算細(xì)胞內(nèi)的mRNA和DNA含量,確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。
?。?)高通量:在同一儀器上可以對(duì)多種不同的環(huán)境或細(xì)胞樣品進(jìn)行同步檢測(cè),實(shí)現(xiàn)大量樣品、少量試驗(yàn)、快速實(shí)驗(yàn),從而實(shí)現(xiàn)了高通量檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)效率。
原位雜交儀作為一種重要的定量PCR方法,已深受臨床、醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究領(lǐng)域的青睞,在基因組學(xué)、藥物研發(fā)、新藥篩選等領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。它不僅可以對(duì)基因表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測(cè),而且可以檢測(cè)少量物質(zhì)的變化情況,更能夠精確地測(cè)量和計(jì)算DNA和mRNA的含量,具有非常重要的臨床研究價(jià)值。